聚六亞甲基胍消毒液殺菌效果及奶牛場應(yīng)用觀察

原創(chuàng) 2016-04-22 張 弦 張崢臻 上海市奶牛研究所

摘要

為了解聚六亞甲基胍的殺菌及奶牛場應(yīng)用效果，采用瓊脂殺菌試驗選擇奶牛場最低使用濃度，微量肉湯稀釋法測定消毒液最低抑菌濃度（MIC），現(xiàn)場帶畜消毒試驗，奶牛粘膜刺激試驗和消毒液抗生素殘留檢測試驗。結(jié)果表明聚六亞甲基胍在實驗室針對奶牛場所分離的大腸桿菌和葡萄球菌的最低抑菌劑量分別為0.125%和0.0625%，因而推薦奶牛場最低使用濃度為0.2%；帶畜消毒時動物并無排斥行為；將推薦最低使用濃度的消毒液涂抹于奶牛鼻粘膜、陰道粘膜、乳房，并無過敏等異常反應(yīng)發(fā)生；當(dāng)聚六亞甲基胍濃度大于0.02%時，抗生素檢測為陽性；當(dāng)其濃度小于0.002%時，抗生素檢測為陰性。

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聚六亞甲基胍；殺菌效果；MIC；帶畜消毒

聚六亞甲基胍（PHMG），為一類環(huán)保型高分子聚合物殺菌劑，其性能優(yōu)越，具有高效、安全、穩(wěn)定、無刺激性等特點。聚六亞甲基胍中的胍基溶于水后帶正電荷，易吸附在帶負電荷的微生物表面，并且能滲透到微生物體內(nèi)，破壞微生物體的細胞結(jié)構(gòu)和能量物質(zhì)代謝，使細菌和病毒喪失了活性。同時，聚合物形成的薄膜將會堵塞微生物的呼吸通道，使微生物迅速窒息而死亡,從而起到殺菌的作用。基于這一作用機理，病原微生物不易產(chǎn)生耐藥性，因此，聚六亞甲基胍在紡織、水產(chǎn)養(yǎng)殖、洗手液等行業(yè)應(yīng)用較為廣泛，但在畜禽養(yǎng)殖業(yè)方面的應(yīng)用較少。為觀察該消毒液殺菌效果和奶牛場應(yīng)用效果，在實驗室和奶牛場分別進行了試驗觀察。本試驗所使用的聚六亞甲基胍溶液的含量為25%。

一、材料與方法

1

消毒劑和試驗菌

本試驗所用消毒液由上海特龍生物科技發(fā)展有限公司提供，聚六亞甲基胍的含量為25%。

本次試驗所用菌種為從上海地區(qū)某奶牛場采集的大腸桿菌和葡萄球菌，經(jīng)稀釋液配制成試驗菌懸液備用。

2

瓊脂殺菌（抑菌試驗）

用去離子滅菌水將消毒液稀釋成不同的濃度（1%、0.5%、0.25%、0.125%、0.063%、0.031%、0.016%）。取兩塊血平板用接種環(huán)挑取大腸桿菌和葡萄球菌分別作致密劃線。將不同濃度的消毒液滴加10μl于瓊脂表面，不同濃度的消毒液排布方式參考藥敏試驗不同的藥敏紙片排布。置37℃培養(yǎng)24h后觀察消毒液覆蓋范圍內(nèi)細菌生長情況，完全無細菌生長的最低濃度推薦為最低使用濃度。

3

微量肉湯稀釋法測定MIC試驗

取一塊96孔板，在每孔中加入含TTC的滅菌營養(yǎng)肉湯100μl。在A∕B∕C∕D∕E∕F六排的第一孔內(nèi)加入有效濃度為5%的消毒液100μl，然后對消毒液進行二倍稀釋。即第一孔中加入消毒液后用移液槍充分吹打（至少5次以上）使消毒液與肉湯充分混勻，然后吸取100μl 加入第二孔再吹打使之與肉湯充分混勻，照此重復(fù)直至最后一孔，吸取100μl 棄去；此時前六排每孔消毒液有效成分稀釋度從左至右依次1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560，1：5120，1：10240，1∶20480，1：40960，1：81920。在A∕B∕C三排中每孔加入5μl大腸桿菌懸液，在D∕E∕F三排中加入5μl葡萄球菌懸液。在G排前六孔加入5μl大腸桿菌懸液，后六孔加入5μl葡萄球菌懸液，作為陽性對照。H排不加肉湯以外其他任何物質(zhì)，作為陰性對照。置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18~24h后觀察，若有細菌生長TTC會顯示紅色；若沒有細菌生長TTC則不變色。前六排中未變紅色的最后一孔所對應(yīng)的濃度便為消毒液的MIC值。

4

奶牛場帶畜消毒試驗

隨機選擇奶牛場奶牛的一個區(qū)（每個區(qū)平均分為兩塊區(qū)域，兩個區(qū)域之間牛只可以自由活動），選擇其中一個區(qū)域，進行噴灑消毒（消毒液濃度為以上試驗所得推薦最低使用濃度），消毒范圍包括空氣、臥床和欄桿。觀察奶牛行為有無異常，是否愿意在這一區(qū)域內(nèi)活動，有無排斥反應(yīng)。

5

粘膜刺激試驗

在奶牛場隨機選擇8頭奶牛，保定后用棉簽蘸取推薦使用濃度的消毒液，涂抹于奶牛鼻粘膜、陰道粘膜以及乳頭表面，五分鐘后觀察奶牛有無過敏或其他異常反應(yīng)。

6

消毒液抗生素殘留檢測

取6個ECLIPSE50（E50）抗生素檢測試劑單孔，使用牛奶將消毒液稀釋到0.2%、0.02%、0.002%、0.0002%的有效濃度，取50μl加入到檢測孔中，剩下兩孔分別做陰性對照（加入無抗奶）和陽性對照（10ppb青霉素樣品）。密封后將檢測孔放入65℃水浴鍋中，培養(yǎng)2小時30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后取出檢測孔從側(cè)面觀測孔中顏色，記錄結(jié)果。

判讀標準：黃色到淺黃色包括綠色為陰性結(jié)果范圍；藍綠色到紫色為陽性結(jié)果范圍。

結(jié)果

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瓊脂殺菌（抑菌試驗）結(jié)果

消毒液在稀釋到0.125%時，其覆蓋范圍內(nèi)大腸桿菌完全不生長，在0.0625%范圍內(nèi)有少量生長，之后的稀釋度生長良好。結(jié)果表明該消毒液對大腸桿菌的有效殺滅濃度應(yīng)在0.125%以上。

消毒液在稀釋到0.0625%時，其覆蓋范圍內(nèi)葡萄球菌完全不生長，在之后的稀釋度生長良好。結(jié)果表明該消毒液對葡萄球菌的有效殺滅濃度應(yīng)在0.0625%以上。

綜合該消毒液對大腸桿菌和葡萄球菌的有效殺滅濃度，推薦實際使用的最低濃度為0.2%。

2

MIC試驗結(jié)果

試驗結(jié)果顯示，5%消毒液在稀釋到第10孔時，指示劑TTC變紅，大腸桿菌及葡萄球菌開始大量生長，這表明消毒液在稀釋到第9孔以后即0.01%以下時，消毒液殺菌效果不佳。即消毒液對大腸桿菌和葡萄球菌的最低抑菌濃度低于0.1gL。

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奶牛場帶畜消毒實驗結(jié)果

奶牛表現(xiàn)正常，對消毒區(qū)域并無明顯排斥行為。表明該消毒液可進行帶畜消毒，消毒不會影響奶牛正?；顒?。

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奶牛粘膜刺激試驗結(jié)果

8頭奶牛粘膜在涂抹0.2%聚六亞甲基胍消毒液后并無明顯、紅腫、發(fā)癢等過敏癥狀，奶牛表現(xiàn)正常。表明該消毒液對奶牛粘膜的刺激指數(shù)為0，屬于無刺激性，因而可在奶牛場內(nèi)放心使用。

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消毒液抗生素殘留檢測結(jié)果

結(jié)果表明消毒液有效濃度在0.02%以上時抗生素檢測為陽性；當(dāng)有效濃度低于0.002%時抗生素檢測為陰性。在奶牛場實際生產(chǎn)中，若是乳頭上攜帶有消毒液，經(jīng)擠奶前清洗、藥浴和擦干后，其殘留量一般為使用劑量的11000~110000，所以，0.2%的聚六亞甲基胍即使接觸到了奶牛乳房，也并不會造成牛奶中抗生素的殘留。

結(jié)語

結(jié)果表明，聚六亞甲基胍消毒液在奶牛場中理想的使用濃度為0.2%，此濃度對奶牛場中的常見菌均有較好的抑制殺滅效果。奶牛對該濃度的消毒液無明顯排斥行為，消毒液對奶牛皮膚和粘膜也無明顯刺激性。因此該消毒液安全可靠，可用于奶牛場帶畜時的環(huán)境消毒。

（作者：張弦，張崢臻，張瑞華，張克